產品名稱

名稱    神經少突膠質細胞

2.組織來源：腦組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

人神經少突膠質細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質細胞分布于中樞神經系統，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。但是用特異性免疫細胞化學染色顯示的少突膠質細胞，其突起并不少，而且還有許多分支。少突膠質細胞的主要功能是在中樞神經系統中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結構、協助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護神經元的正常功能。其異常不僅會導致中樞神經系統脫髓鞘病變，還會引起神經元損傷或精神類疾病，甚至可以引發腦腫瘤。根據少突膠質細胞的分布和位置可分為三種：①束間少突膠質細胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中樞神經系統的白質的神經纖維束之間；②神經細胞周少突膠質細胞（perineuronal-oligodendrocyte），分布在中樞神經系統的灰質區，常位于神經細胞周圍，與神經細胞的關系密切，故又稱為神經細胞周衛星細胞（perineuronal-satellite-cell），但在神經細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質細胞的薄片狀突起分隔；③血管周少突膠質細胞（pcrivascular-oligodendrocyte），主要分布在中樞神經系統內的血管周圍。少突膠質細胞形成的髓鞘膜是最為特化和復雜動物細胞膜之一，其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩定結構。如半乳糖腦苷脂（GC），它是髓鞘的一種主要類脂，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質細胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來，神經發育學科進展較快，更多的少突膠質細胞分子標記物被鑒定出來，如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。

5.方法簡介：

實驗室分離的人神經少突膠質細胞采用胰蛋白酶消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

實驗室分離的人神經少突膠質細胞經GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

培養基含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-H121

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態梭形、多角形

傳代特性不增殖；不傳代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

產品特點:

1、 使用方便:不需昂貴設備。

2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

一、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前，應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質，例如是否有雜細胞或者支原體等。

3. 使用的DMSO 應為試劑級等級，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存，勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。

4. 冷凍保存的細胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細胞濃度不要太高，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。

4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6，依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 ％ DMSO，若是不確定細胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時，亦應作一個backup culture，以防止冷凍失敗。

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；

4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。