冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：   

商品介紹：

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經 (Neuraminidase / NA) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 BRCA2 / BCCIP 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 PILR-alpha / PILRA 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 PILR-alpha / PILRA 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 PRELP 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 PRELP 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠外周血樹突狀細胞(DC細胞)四己基氫銨 用于離子色譜, ≥99.0% (T)N,N'-二環己基碳二亞 99.0%Anti-CD74/MHC II  CD74抗體

N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 99%N,N'-琥珀酰亞基碳酸酯 98%Anti-CLEC2D/OCIL  CLEC2D蛋白抗體

N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 97%4-二甲吡 99%Anti-CD80/B7-1  激分子B7-1蛋白抗體

2,4,5-三氯苯 分析標準品,99%4,4'-二甲氧基三苯基氯 98%Anti-CD71/TFR  轉鐵蛋白受體抗體

1,2,3,4-四氯苯 分析標準品,98%4,5-二基咪唑 98%Anti-B7-1/CD80  激分子B7-1蛋白抗體

5-硫代-D-葡萄糖 96%4,5-二基咪唑 99%Anti-CD73  胞漿-5′-核苷酸-Ⅱ抗體

三溶液 50%溶液二吡咯烷基(N-琥珀酰亞氨氧基)碳六氟鹽  98%Anti-CD79A/IGBP-1  球蛋白結合蛋白-1抗體

二十三烷 分析標準品,99.5%4-(4,6-二甲氧基三)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽 97%Anti-CD82/KAI1  腫瘤轉移抑制蛋白1抗體