細胞實驗步驟：

一、細胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細胞密度及狀態(tài)；

14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

人原代軟骨細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持人原代軟骨細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代軟骨細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代軟骨細胞的培養(yǎng)。

注意事項：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

谷半胱連接酶(GCLM)重組蛋白 Recombinant Glutamate Cysteine Ligase, Modifier Subunit (GCLM)

C1QBP Protein Human 重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HAVCR2重組小鼠 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

SPHK1重組人 SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 蛋白 Protein

大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒 ，英文名： NF-κB p65 ELISA Kit

Rabbit heat shock protein 70 (HSP-70) ELISA Kit 兔熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒

嗜肺軍團桿菌(LP)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMouseBeta-catenin,Beta-catELISAKit小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白

體液肌酸激酶(CK)總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量試劑盒20次

2D3/DVD/DHVD3OH人1,25二羥基D3

總鐵快速測試盒   Total iron rapid test case

錳快速測試盒   Manganese rapid test case

鎳快速測試盒   Nickel rapid test case

PH值快速測試盒   PH quick test case

豬總蛋白(TPS)試劑盒

Human nuclear maix protein 22 (NMP-22) ELISA Kit 人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)試劑盒

Rabbitplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit 兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforApo-E(HumanApolipoproteinE)ELISAKit人載脂蛋白E

血白細胞分離試劑盒10/50/100次

Porcinemelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒

NACA2蛋白抗體

細胞周期蛋白3抗體

人原代軟骨細胞專用培養(yǎng)基BCAM重組小鼠 BCAM 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

癌胚抗原(CEA)重組蛋白 Recombinant Carcinoembryonic Antigen (CEA)

GSTZ1重組人 GSTZ1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

C1QBP Protein Human 重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FGFR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 標(biāo)簽)

細胞培養(yǎng)步驟：

?細胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細胞傳代?：

當(dāng)細胞長到80%~90%時，進行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當(dāng)細胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細胞進行凍存。

將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。

將細胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。