兔原代膀胱平滑肌細胞專用培養(yǎng)基

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

Leptin 瘦素(抗原 0.5mgLeptin 瘦素(抗原)

CCNE1 Protein Human 重組人 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白

CD200重組食蟹猴 CD200 蛋白 Protein

IL1R1 Protein Mouse 重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CD59重組人 CD59 蛋白 Protein

大鼠肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)試劑盒 ，英文名： L-FABP ELISA Kit

Porcine ierleukin 6 (IL-6) ELISA Kit 豬白介素6(IL-6)試劑盒

小腸結(jié)腸耶爾森氏菌(YE)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMDC/CCL22ELISAKit大鼠巨噬細胞來源的趨化因子

體液羥脯(HYP)比色法定量試劑盒20次

ELISAKitCIAP牛的牛小腸堿性0酸酶

雄激素   英文名稱：   Androgen   規(guī)格：      英文縮寫：   ADG

脂聯(lián)素   英文名稱：   Adiponectin   規(guī)格：      英文縮寫：   APN/ADP

脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   Adipocyte Fatty Acid Binding Protein   規(guī)格：      英文縮寫：   a FABP

載脂蛋白   英文名稱：   Apolipoprotein   規(guī)格：      英文縮寫：   AI

小鼠乙酰酯酶(AChE)試劑盒 96T/48T

Human soluble protein 185 (sp185/HER-2) ELISA Kit 人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)試劑盒

HumancathepsinD,cath-DELISAKit 人組織蛋白酶D(cath-D)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor5-LO/LOX(Human5-lipoxygenase)ELISAKit人5脂加氧酶

飲料阿斯巴塘(aspaame)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次

MouseMacrophageInflammatoryProtein1δ,MIP-1δELISAKit小鼠巨噬細胞性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)試劑盒規(guī)格：96T/48T

Dysfip1蛋白抗體

AF488標(biāo)記人CD25單克隆抗體

兔原代膀胱平滑肌細胞專用培養(yǎng)基CD200重組食蟹猴 CD200 蛋白 Protein

Leptin 瘦素(抗原 0.5mgLeptin 瘦素(抗原)

CD59重組人 CD59 蛋白 Protein

CCNE1 Protein Human 重組人 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白

IL1R1 Protein Mouse 重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)