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NLE Notchless蛋白elisa基本步驟

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產(chǎn)品廠地:上海市
更新時(shí)間:2025-02-19
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問(wèn)量:503
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品牌其他品牌貨號(hào)GOY-01E13143
規(guī)格48T/96T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域化工
英文名稱Notchless(NLE)ELISA Kit

注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他檢測(cè)試劑盒請(qǐng)咨詢銷售人員。

產(chǎn)品全稱:NLE Notchless蛋白elisa基本步驟

英文名稱:Notchless(NLE)ELISA Kit

貨號(hào):GOY-01E13143

規(guī)格:48T/96T

服務(wù):可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),以及產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和技術(shù)指導(dǎo)等

保存環(huán)境:2-8℃低溫、避光、防潮

主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。

檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..需要而未提供。QQ截圖20200429164220.jpg

具有如下優(yōu)點(diǎn):

一、高效、靈敏、特異的抗體;

  二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

  三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

  四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;

  五、性價(jià)比非常好,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

試劑和樣本的控制方法:

一、試劑

1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行,已獲得國(guó)家承認(rèn)的三證",每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。

 

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;

類風(fēng)濕因子的控制方法:

F(ab)2替代完整的IgG

標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

檢測(cè)抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本中使RF降解。

試劑配制:

1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。

2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。

3、樣品(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、標(biāo)記抗體(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6、標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水25倍。

10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

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操作步驟:

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本40μL(即樣本5倍);空白對(duì)照孔不加。

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。

7、溫育:重復(fù)4的操作。

8、洗板:重復(fù)5的操作。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。

10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。

12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以倍數(shù)。

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